熒光PCR擴(kuò)增儀的工作原理和特點(diǎn)
更新時(shí)間：2023-07-19 點(diǎn)擊次數(shù)：1334次
熒光PCR擴(kuò)增儀是一種常用的實(shí)驗(yàn)儀器，用于檢測和分析聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的過程和結(jié)果。其工作原理基于PCR技術(shù)，但在反應(yīng)過程中引入了熒光探針，使得擴(kuò)增結(jié)果可以實(shí)時(shí)監(jiān)測和定量分析。
一、工作原理：
PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備：將待擴(kuò)增的DNA模板、引物、熒光標(biāo)記的探針等組分加入PCR反應(yīng)管中。
反應(yīng)條件設(shè)定：設(shè)置所需的PCR循環(huán)參數(shù)，如溫度、時(shí)間等。
熱循環(huán)：PCR擴(kuò)增儀通過控制加熱模塊中的溫度，實(shí)現(xiàn)PCR循環(huán)的不同階段，包括變性、退火和延伸。 a. 變性：將DNA模板變性為單鏈，通常在高溫下進(jìn)行。 b. 退火：引物與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)結(jié)合，通常在較低的溫度下進(jìn)行。 c. 延伸：DNA聚合酶在適當(dāng)溫度下通過引物將DNA模板復(fù)制，合成新的DNA鏈。
熒光信號檢測：儀器配備了熒光探測器，可實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增過程中的熒光信號。 a. 熒光探針：儀器中使用的探針通常是帶有熒光染料和熒光抑制劑的兩個(gè)或多個(gè)堿基的寡核苷酸序列。在PCR過程中，如果目標(biāo)序列與引物匹配，則熒光探針會被切割，釋放出熒光信號。 b. 熒光信號檢測：擴(kuò)增過程中，熒光PCR擴(kuò)增儀實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號的強(qiáng)度。強(qiáng)度與目標(biāo)序列的數(shù)量成正比，可以通過熒光信號的變化曲線來定量分析PCR結(jié)果。
二、特點(diǎn)：
實(shí)時(shí)監(jiān)測：可以實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR過程中的熒光信號變化，提供即時(shí)的擴(kuò)增結(jié)果分析。
定量分析：通過熒光信號的強(qiáng)度，可以對PCR擴(kuò)增過程中的目標(biāo)序列進(jìn)行定量分析，如測定起始模板的數(shù)量。
高靈敏度：儀器對熒光信號具有高靈敏度，能夠檢測到微量的目標(biāo)序列。
高特異性：由于采用了引物和熒光探針的設(shè)計(jì)，儀器儀對目標(biāo)序列具有高特異性，可以準(zhǔn)確檢測目標(biāo)序列的擴(kuò)增。
自動化操作：現(xiàn)代的熒光PCR擴(kuò)增儀通常具有自動化的功能，可以進(jìn)行多個(gè)樣品的批量處理，提高實(shí)驗(yàn)效率。
數(shù)據(jù)分析軟件：儀器通常配備了數(shù)據(jù)分析軟件，可以對擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行曲線分析、圖像導(dǎo)出等進(jìn)一步的數(shù)據(jù)處理。
